熊本牡蛎人工繁育技术研究

熊本牡蛎在华南海域的人工养殖技术结果表明，熊本牡蛎的繁殖周期比香港牡蛎的生长周期长，每年从四月到十月持续6个月，一年一次喂单云微藻，每一次的生长发育。6天前，雄本牡蛎对苗木的繁殖密度具有很高的敏感性。(壳高小于150亩)。10/ml实验组生长最快(壳高148.22亩(+6.98)，存活率最高(68.43%+13.56)。壳顶中后期5/ml实验组表现最佳。盐度试验表明，雄本牡蛎盐度较宽，15 ppt-30 ppt可用于牡蛎育苗。生长和存活率的测定结果表明，最佳盐度为20-25ppt。

肖述，符政君，张跃环，喻子牛

(湛江海洋经济动物实验站，中国科学院，广东湛江524001)

熊本牡蛎;人工养殖;盐度;密度

Crassostreasikamea(Crassostreasikamea)隶属于(软体动物)、(LamelliBranchia)、(Pterimorpja)、(Pteroida)、(Ostreaceae)和(Crassostrea)。牡蛎曾被认为是一种长牡蛎。gigas的一个地理亚种);后来通过杂交亲和性试验、细胞染色体技术、同工酶技术等，初步确定熊本牡蛎应被分类为一个独立的物种[5、*随着分子标记技术的发展，熊本牡蛎的分类状况得到进一步澄清[6]和.熊本牡蛎是一种宽温、宽盐的经济品种，长期以来被错误地认为只存在于日本(日本南部九州岛熊本县有明海湾)。从那时起，一些学者推测韩国和中国的一些地区有分布[11]。据证实，该牡蛎在中国的主要分布区域是广东、江苏、广西和福建[1、3、8、10]。

熊本牡蛎不仅肉质鲜美、营养丰富、市场价值高，而且具有与其他牡蛎不同的优良特性，不受性腺发育的影响，填补了牡蛎养殖季节优质产品的空白。然而，由于牡蛎个体较小，产量较低，在我国重视产量的年代还没有引起足够的重视，对熊本牡蛎育苗的研究工作也很少[2-3]。本世纪初，熊本牡蛎在美国已经工业化，其产品甚至在满足国内市场的同时出口到日本。2008年，日本也开始了苗木人工养殖和大规模养殖，希望将熊本牡蛎建设成为其特色养殖业[11]。随着国际牡蛎价值的进一步挖掘和国内市场对珍稀优质牡蛎需求的不断扩大，熊本牡蛎育苗、规模化生产等相关研究工作在我国显得尤为重要和紧迫。尤其是近年来，北太平洋牡蛎一直受到夏季死亡的困扰。广东和广西的香港牡蛎品种在冬末和春初经常遭受无法解释的大规模死亡。开发熊本牡蛎人工繁殖技术，对优化产品结构，提高产品价值，维护牡蛎产业的均衡稳定发展具有重要意义。本研究旨在探讨人工育苗的实践，为后续牡蛎-熊本综合工业人工育苗及相关研究工作提供参考。

1. 材料与方法

1.1亲和力收集和性腺同步

2012年4月、7月和10月，在湛江坡头区钱塘镇三窝采集了约30公斤的熊本牡蛎。两小时内，父母被转移到湛江东海岛中国科学院“热带海洋经济动物实验站-东南实验基地”。清洁表面后，选择高质量的人员在室内水泥池中笼养，促进成熟。每次选择约100个亲本，母壳的高度范围为4.5-6.8厘米，壳长度为3.4-4.2厘米。成熟时使用天然海水，水温为28.0-30.0°c，盐度为25-26ppt，ph值为7.5-8.2，并喂入混合单细胞诱饵(小球藻。、等鞭金藻属Zangjiangensis和毛壳虫Chaetoceros sp.，按常规管理。

1.2 受精、孵化

性腺同步在室内水泥池中培养7d，解剖受精，用5 0 0目筛丝滤网过滤卵细胞，取出破碎的组织块，置于5 0L盐度梯度海水(温度30℃)中。pH：8.1)，浸泡10~20min(比浸泡时间由卵细胞成熟度决定)。然后解剖雄性个体并在精子活化后5分钟进行人工授精。它被受精并在25ppt的盐度和30°c的温度下孵化。

1.3密度和盐度梯度培养

1.3.1密度梯度培养

将孵出的幼虫在100L聚乙烯白色桶中以5,10,15,20 / ml幼虫的密度部分培养，并设定3个重复。小球藻(Chlorella sp.)在整个过程中对微藻)。

1.3.2盐度梯度培养

其余幼虫分别置于4种不同盐度梯度培养体系中，盐度分别为15、20、25和30ppt。实验在100L白色聚乙烯桶中进行，每次重复试验设定为3个重复组。用20ppt瞬时培养1d后，进入15ppt系统，以避免因盐度差异过大而造成的偏差。

1.4 测定指标

受精是根据极地身体的释放来计算的;孵化率是d形幼虫数量和受精卵数量的百分比;幼虫的存活率是每个测量的存活个体数与d形幼虫数的比率;变态率是Zhibeishu的幼虫数与脚板幼虫数的比率。用10×筛孔测微计测量幼虫壳高，每次随机抽取30个个体。

1.5 数据处理

采用SPSS16.0统计软件对数据进行分析处理。采用单因素方差分析(LSD)对不同实验组的数据进行比较。差异有显著性意义(P<0.05)。两组比较差异有显著性(P<0.05)。采用统计软件对数据进行分析和处理。

2. 结果

2.1 受精、孵化

熊本牡蛎刚解剖出的卵呈梨形，经20min浸泡成熟后，卵径大小为50±2.15 m。培养温度为30.5°C，盐度为25 ppt。15小时后发育成D型幼虫，消化系统开始发育。20小时后，消化系统在显微镜下发育良好，表明消化系统可以通过开口进入。2012年4月至10月进行了3次(4月、7月和10月)的人工繁殖，受精和胚胎发育正常。胚胎发育及其特征见表1，孵化及幼虫存活情况见表2。

2.2培养密度对幼虫生长和存活的影响

在不同种植密度(5、10、15、20)下，d=20/ml幼虫的生长明显低于其他密度群(p

2.3盐度梯度对幼虫生长(壳高)和存活的影响

SPSS的多重比较结果如表3所示，表明不同盐度组的生长速率存在差异。20 ppt和25 ppt处理组的生长速度快于15 ppt和30 ppt盐分处理组。两组之间没有显著差异，但两组之间有显著差异(见表中同龄人之间的字母差异)。表4显示不同盐度处理下的存活率差异，15ppt、20ppt和25ppt组的存活率较高，3d龄20ppt组的存活率为95.32%，9日龄25ppt组的存活率最高(81.77%)。15d龄20ppt组的存活率最高(73.85%)。从表中可以看出，15d龄15ppt组的存活率最差，仅为50.55%。

3. 讨论

广东海域牡蛎熊本性腺发育早于牡蛎香港。性腺在三月份开始发育，四月份产卵，一年内多次产卵。广东熊本牡蛎的繁殖周期长达6个月(每年4月至10月)。但是，为了保证性腺发育的同步性，在性腺发育的中后期进行室内营养强化，有利于后期的苗木繁育。营养强化和其他牡蛎没有什么不同。精子和卵子的质量对受精率有很大影响。与中国太平洋牡蛎和香港牡蛎相比，早期胚胎发育速度略快。牡蛎规模化养殖时，牡蛎的绝对卵数较少，亲本数较大。在4、7、10月进行了3次养殖试验，结果表明，南海牡蛎性腺恢复较快，在4~10月可进行多批人工养殖。此外，在整个实验过程中，饲喂单云微藻，未发现熊本牡蛎幼虫有明显的不适，这对我国南方高温多雨地区难以培育金藻具有重要意义。

熊本牡蛎的人工繁殖密度对其育苗成败至关重要。6日龄前，5-20/ml育苗密度对生长和成活无显著影响。早期高密度组生长略好于低密度组，但差异无统计学意义。高密度组的生长和稳定性好于低密度组，这可能与牡蛎种群的生态特征有关，因为牡蛎个体较小(早期只有60-70亩)，造成环境变化。适应性可能部分取决于种群大小和密度，这在其他贝类生产实践中经常发现。然而，随着个体的增加(壳层高度超过150μ)，低密度群d=5/ml逐渐反映出生长优势，而高密度群d=20的生存率在12岁阶段的死亡率超过95%。原因可能是南方水温较高，随着个体的快速生长，繁殖系统中代谢物含量急剧上升，极易爆发疾病。幼虫的下沉和死亡经常在短时间内发生。因此，综合试验的结果，未来的种子生产可以用于高密度培养的D形阶段(d = 10)，进入壳顶阶段，逐渐将密度降低到d = 5，最后后壳顶部，眼点周期，密度可进一步降低。在随后的盐度梯度试验中，在不同发育阶段，通过将密度从10/ml逐渐调整到1/2/ml，15日龄仔鱼的存活率显著提高。

牡蛎的盐度很大。幼虫对盐度的适应性反映了其自然分布海域的盐度特征。与香港牡蛎、太平洋牡蛎、福建牡蛎在中国沿海的生态位重叠。最佳盐度分布应在香港牡蛎和其他两个牡蛎之间。盐度梯度试验表明，15ppt和30ppt均可进行人工育苗。生长和成活率结果表明，2 0ppt和2 5ppt是熊本牡蛎的最适盐度，其次是30ppt盐度组，15ppt组成活率最差。其结果与国外学者的结果类似[9]。在盐度实验部分，为了获得相对稳定的实验结果，我们在不同发育阶段进行了幼虫密度调整，并且在每个梯度中始终保持培养密度，因此它不干扰实验结论，但改进了实验种子。培育变态和幼苗成功率。

参考文献

1.1。杜宣，郭喜明，钱鲁闽。福建沿海牡蛎的主要种类和分布。台湾海峡, 2009,28(3): 399-404.2. 吕晓燕.

2. 熊本牡蛎人工繁育与长牡蛎单体苗种培育技术研究.[硕士学位论文]青岛: 中国海洋大学, 2013.4. 许飞.

3. 熊本牡蛎单体苗种生产和养殖技术研究.[硕士学位论文]青岛: 中国海洋大学, 2013.4. 许飞.

4. 小庙洪牡蛎礁巨蛎属牡蛎间生殖隔离研究.青岛：中国科学院研究生，2009年。

5. Ahmed, M. Cytogenetics of oysters. Cytologia,1973,38:337-346.

6. Banks M.A., Hedgecock D., Walters C. Discriminationbetween closely related Pacific oyster species(Crassostrea)via mitochondrialDNA sequences coding for large subunit rRNA.Biotechnology, 1993 2:129 -136.

7. Buroker,N., Hershberger,W., Zhou, K. The population genetics of the family Ostreidael.Intraspecific studies on Lagerstroemia grandiflora and Stevia merchandise.Marine Biology, 1979, 54: 157-169

8. Reece,K.S. ,Cordes,J.F., Stubbs,J.B., Hudson,K.L., Francis,E.A.Molecular phylogenies help resolve taxonomic confusion with Asian Crassostreaoyster species.Marine Biology, 2008, 153 709 721.

9. Robinson A. Gonadal cycle of Crassostreagigas kumamoto(Thunberg) in Yaquina Bay,Oregonandoptimum conditions for broodstock oysters and larval culture.Aquaculture, 1992, 106:89 -97.

10. Sekino,M.,Sato,S.i.,Hong,J.S.,Li,Q. Contrastingpattern of mitochondrial population diversity between an estuarine bivalve,theKumamoto oyster Crassostrea sikamea,and the closely related Pacific oysterC.Gigas, Marine Biology, 2012, 159:2757-2776.

11. Sekino,M.In search of the Kumamoto oyster Crassostreasikamea(Amemiya,1928)based on molecular markers:is the natural resource atstake?Fishery Science, 2009, 75 819 831.